63200 AAV Purification Mini Kit ( 20 preps )

63200 AAV Purification Mini Kit ( 20 preps )

Zahušťování a čištění AAV vektorů z buněčného lyzátu a buněčných kultivačních médií

Rekombinantní adenoasociované vektory (AAV) jsou velmi slibnými nástroji pro in vitro i in vivo genový transfer. Sady Norgen pro čištění AAV poskytují rychlé a jednoduché postupy pro zahušťování a čištění AAV vektorů z buněčného lyzátu a buněčných kultivačních médií. Čištění je založeno na srážení na speciální pryskyřici společnosti Norgen Biotek. Kontaminující buněčné zbytky jsou z vzorku z velké části odstraněny odstředěním, zatímco kontaminující DNA a RNA jsou redukovány enzymatickým štěpením. AAV vektory čištěné tímto způsobem jsou vysoce aktivní pro použití v experimentech s transdukcí in vitro a in vivo.

Každá odstředivková kolona je schopna koncentrovat a purifikovat AAV z 0,5–8 ml buněčného peletu, buněčného kultivačního média nebo směsi buněk a kultivačního média. Až 50násobná koncentrace vzorku. AAV vektor purifikovaný tímto způsobem je vysoce aktivní pro použití v experimentech in vitro transdukce a je eluován do malého objemu (200 µl). Doba přípravy 4 vzorků je 1,5 hodiny, z toho 45 minut je doba praktické práce.

Vlastnosti

• Čištění AAV z jakéhokoli vstupu – buněčné frakce nebo mediální frakce.
• Vysoká výtěžnost AAV, až 90 %.
• Není potřeba žádné speciální vybavení.
• Čištění z různých sérotypů AAV (včetně AAV6 a AAV9).
• Výsledkem je vysoce aktivní AAV pro in vivo a in vitro experimenty.
• Čištění je založeno na spinové kolonové chromatografii, která využívá separační matrici z pryskyřice Norgen.

Specifikace

• Kapacita kolony    Minimálně 1 x 1010 částic AAV stanovených pomocí qPCR
• Serotyp vektoru AAV    Libovolný
• Průměrná výtěžnost    50–80 %
• Typ vstupu    Buňky, média nebo směs
• Objem vstupu: 90 ml–900 ml
• Minimální objem eluce    1 ml–10 ml
• Doba potřebná k dokončení purifikace 2,5–3,5 hodiny
• Skladovací podmínky a stabilita produktu: DNAáza I a RNAáza A by měly být po dodání skladovány při teplotě -20 °C. Eluční pufr O by měl být po dodání skladován při teplotě 4 °C s pevně uzavřeným víčkem. Všechny ostatní roztoky by měly být uchovávány pevně uzavřené a skladovány při pokojové teplotě. Po otevření by roztoky měly být skladovány při teplotě 4 °C. Tato souprava je stabilní po dobu 1 roku od data dodání.

Složení kitu

• Lyzační pufr S: 5.5 ml
• DNAáza I: 2 x 25 μl
• RNAáza A: 60 μl
• HL-SAN nukleáza: neobsahuje
• Vazebný pufr A: 4 ml
• Čisticí roztok C: neobsahuje
• Čisticí roztok D: neobsahuje  
• Promývací roztok C:  60 ml
• Suspenze E: 2 x 14,5 ml
• Eluční pufr O: 8.5ml
• Neutralizátor proteinů:  4 ml
• Spinové kolony: 20
• Mini spinové kolony: 20
• Midi spinové kolony (šedý obsah) se sběrnými zkumavkami: neobsahuje
• Midi spinové kolony (bílý obsah) se sběrnými zkumavkami: neobsahuje
• Maxi spinové kolony (šedý obsah) se sběrnými zkumavkami: neobsahuje
• Maxi spinové kolony (bílý obsah) se sběrnými zkumavkami: neobsahuje
• Sběrné zkumavky: 40
• Eluční zkumavky (1,7 ml): 20
• Midi eluční zkumavky (15 ml): neobsahuje
• Maxi eluční zkumavky (50 ml): neobsahuje
• Příbalový leták 

Dokumenty

NORGEN 63200 AAV Purification Mini Kit PROTOCOL

NORGEN 63200 AAV Purification Mini Kit MSDS